Le guide essentiel des tubes centrifugants: timing, techniques et meilleures pratiques "

La centrifugation est une technique de laboratoire essentielle utilisée dans une grande variété de disciplines telles que les diagnostics cliniques, la recherche et la biotechnologie. Le processus implique de tourner des échantillons à des vitesses élevées pour séparer les composants en fonction de leurs densités. Les tubes doivent être centrifugés au bon moment et dans des conditions spécifiques pour garantir des résultats précis. Voici une plongée profonde dans le sujet pour vous aider à comprendre quand, pourquoi et comment centrifuger efficacement.

1. Qu'est-ce que la centrifugation?

La centrifugation est le processus d'application de la force centrifuge à un échantillon afin de séparer ses composants. La force fait que les composants plus denses se déplacent vers l'extérieur, tandis que les composants plus légers restent plus proches du centre. Les applications les plus courantes impliquent la séparation des liquides et des solides, comme le plasma du sang ou la séparation des cellules des milieux de culture en milieu de recherche.

2. Quand Tubes à centrifugeuse ?

La centrifugation n'est pas quelque chose qui devrait être fait à des temps arbitraires. Il doit se produire dans certaines circonstances ou des types de préparation spécifiques pour assurer l'intégrité de l'échantillon. Vous trouverez ci-dessous des scénarios courants lorsque les tubes doivent être centrifugés:

un. Séparation des composants sanguins
Plasma et extraction sérique: le sang est généralement centrifugé peu de temps après la collecte pour séparer ses composants. Le plasma est séparé après que le sang est recueilli dans des tubes avec des anticoagulants, tandis que le sérum est collecté après la coagulation (sans anticoagulants). Si les tubes avec du sang sont laissés debout trop longs, la coagulation peut se produire, conduisant à un échantillon inexact.

Quand centrifuger: le sang doit généralement être centrifugé dans les 2 heures suivant la collecte. Les retards peuvent provoquer la formation et la dégradation des composants cellulaires.

né Séparation cellulaire et surnageant
Culture cellulaire et recherche: lorsque vous travaillez avec des cellules cultivées, une centrifugation est nécessaire pour séparer les cellules des milieux de culture. Par exemple, les cellules peuvent être granulées pour récolter les protéines, l'ARN ou l'ADN.

Quand centrifuger: la centrifugation des cultures cellulaires est effectuée lorsque la culture atteint la confluence ou après avoir ajouté des substances (par exemple, médicaments ou stimulants) aux cellules. Il est essentiel de centrifuger au moment approprié pour éviter un stress inutile sur les cellules, ce qui pourrait compromettre leur viabilité.

c. Clarification des échantillons
Dans de nombreuses analyses biologiques et chimiques, les particules doivent être retirées des solutions pour clarifier les échantillons d'analyse.

Quand centrifuger: généralement, après la collecte des échantillons ou si des particules (par exemple, les précipités, les fragments de tissu) sont présents en solution.

d. Purification des molécules biologiques
La centrifugation est une étape clé dans la purification des protéines, des acides nucléiques et d'autres molécules biologiques. L'Ultracentrifugation peut séparer les particules au niveau subcellulaire ou moléculaire.

Quand centrifuger: cette étape doit être effectuée immédiatement après la collecte des échantillons ou après la précipitation d'une molécule d'intérêt.

3. Combien de temps et à quelle vitesse les tubes doivent-ils être centrifugés?
Une fois que vous avez établi que la centrifugation est requise, la question suivante est la durée et à quelle vitesse vous devez centrifuger l'échantillon. Les conditions correctes dépendent du type d'échantillon et de ce que vous essayez de séparer.

un. Vitesse (RPM ou RCF)
La vitesse est généralement mesurée en révolutions par minute (tr / min) ou en force centrifuge relative (RCF). Le RCF est plus précis pour déterminer la quantité de force appliquée à un échantillon.

La centrifugation à basse vitesse (par exemple, pour la séparation du plasma sanguin) varie généralement de 1 000 à 3 000 tr / min (environ 1000 à 1500 x g).

La centrifugation à grande vitesse (par exemple, pour la séparation des cellules ou des organites) peut varier de 5 000 à 20 000 tr / min (environ 3 000 à 10 000 x g).

L'Ultracentrifugation (pour séparer les macromolécules ou les composants subcellulaires) peut atteindre des vitesses supérieures à 50 000 tr / min (environ 100 000 x g).

né Temps
La durée de la centrifugation peut varier, mais elle se situe généralement dans la plage de 5 à 20 minutes.

Les échantillons de sang peuvent être tournés pendant 10 à 15 minutes.

La granulage cellulaire ou les précipitations de protéines peuvent nécessiter 15 à 20 minutes à une vitesse plus élevée.

c. Température
Dans certains cas, le contrôle de la température est essentiel pour empêcher la dégradation des échantillons. Par exemple, les échantillons de sang et de plasma sont souvent tournés à 4 ° C pour réduire le risque d'hémolyse ou de dégradation des protéines.

La température ambiante est bien pour des échantillons moins sensibles comme certains produits chimiques ou petites particules.

4. Facteurs à considérer avant la centrifugation

Plusieurs facteurs affectent les résultats de la centrifugation et doivent être pris en compte pour garantir que vos échantillons sont traités correctement.

un. Type d'échantillon
Les échantillons biologiques (par exemple, le sang, les cellules, les tissus) ont des densités et des propriétés physiques différentes de celles des solutions ou des particules chimiques. Pour les échantillons biologiques, il est crucial de choisir le matériau de tube et les additifs corrects. Par exemple, certains tubes contiennent des anticoagulants pour le traitement du sang, et certains peuvent résister à la température et à la pression de la centrifugation à plus grande vitesse.

né Taille du tube à centrifugeuse
La taille du tube a un impact sur la vitesse et la force optimales de la centrifugation. Des volumes plus importants peuvent nécessiter des vitesses plus lentes pour une séparation efficace, tandis que les volumes plus petits peuvent être centrifugés à des vitesses plus élevées.

c. Échantillon de viscosité
Des échantillons très visqueux peuvent nécessiter un temps de centrifugation plus long ou une vitesse plus lente pour éviter d'endommager l'échantillon. De plus, des tubes spécialisés avec une résistance plus élevée aux forces centrifuges peuvent être nécessaires.

d. Solde centrifugeuse
Il est crucial que les tubes soient équilibrés dans la centrifugeuse. Des tubes avec un volume et un type de contenu similaires doivent être placés les uns envers les autres pour éviter les déséquilibres qui peuvent endommager la machine et compromettre la qualité de la séparation.

5. meilleures pratiques de centrifugation

Centrifuge pré-chillant pour les échantillons sensibles: pour le sang, le plasma et certaines protéines, pré-récompenser la centrifugeuse à 4 ° C peut réduire la dégradation de l'échantillon.

Évitez les tubes de surplomb: les tubes doivent être remplis au volume recommandé (généralement 75% plein) pour éviter les fuites ou la séparation inefficace.

Ne dépassez pas la centrifugeuse: une centrifugation prolongée ou excessive peut endommager des particules, des cellules ou des molécules fragiles, alors suivez les temps et les vitesses recommandées.

Mélanger les échantillons doucement avant la centrifugation: en particulier pour les échantillons biologiques, assurez-vous qu'ils sont soigneusement mélangés avant de centrifuger pour éviter une sédimentation inégale.

6. Lors de ne pas centrifuger les tubes

Il existe également des scénarios où la centrifugation peut ne pas être appropriée:

Pour les tubes avec des échantillons sensibles à la chaleur: Certains échantillons se dégradent lorsqu'ils sont exposés à des vitesses élevées ou à des temps de centrifugation prolongés. Dans ces cas, des méthodes de séparation alternatives doivent être prises en compte.

Lorsque les échantillons doivent être analysés immédiatement: le centrifugation peut parfois modifier la composition d'un échantillon, donc si une analyse immédiate est nécessaire (par exemple, pour certains tests), il est important de peser les compromis.

7. Conclusion

Tubes centrifugants Au bon moment et dans les conditions correctes est crucial pour obtenir des résultats précis et fiables. Que vous sépariez les composants sanguins, la clarification des liquides ou la récolte des cellules et des protéines, comprenez quand, combien de temps et à quelle vitesse à centrifuger est fondamentale pour votre travail. En adhérant aux directives et aux meilleures pratiques établies, vous pouvez vous assurer que vos échantillons sont traités efficacement et avec une perte d'intégrité minimale.